2. 用去離子水將濃縮洗滌液(10X)、濃縮稀釋液(10X)，進(jìn)行 10 倍稀釋。
3. 取出包被的微量酶標(biāo)板，并做好陰、陽(yáng)性對(duì)照品和樣品的加樣位置的標(biāo)記。
4. 準(zhǔn)備動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血。
六、實(shí)驗(yàn)過(guò)程
1.取準(zhǔn)備好的血清按照以下方式進(jìn)行加樣。
? 50 uL 陰性對(duì)照（NC）加入孔 A1 和 B1。
? 50 uL 陽(yáng)性對(duì)照（PC）加入孔 C1 和 D1。
? 50 uL 待測(cè)樣本加入剩余其他孔。
2.輕輕振勻孔中樣品(注意勿溢出)，貼上封板膜，室溫（21℃±5℃）下孵育 2 h。
3.小心揭掉封板膜，棄去孔中液體，300uL 洗滌液清洗 2 次。每一次洗滌后，棄去孔中液體，最后一次清洗完
后，在吸干材料上用力拍干孔內(nèi)液體。在每一次洗滌和加入下一個(gè)試劑之前，避免孔壁變干，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4.濃縮酶標(biāo)記抗體（10X）用稀釋緩沖液（1X）進(jìn)行 10 稀釋?zhuān)?/span>1 份濃縮液+9 份稀釋緩沖液），吸取 100 uL 稀
釋好的酶標(biāo)抗體，加入孔中。
5.室溫(21℃±5℃)下孵育 30 min，倒掉孔中液體，300 uL 洗滌液清洗 3 次。
6.將底物 A 與底物 B 按照體積比例 1:1 混合，輕輕旋轉(zhuǎn)或振蕩均勻后吸取 100 uL 配置好的底物溶液，加入孔
中，避光孵育 20 min。(底物溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用)
7.吸取 50 uL 終止液加入孔中，終止反應(yīng)。
8.酶標(biāo)儀檢測(cè)條件設(shè)置成波長(zhǎng) 450nm 進(jìn)行讀數(shù)。
七、實(shí)驗(yàn)有效性判斷
在下列情況下，即可判斷實(shí)驗(yàn)有效：
?陰性對(duì)照平均 OD 大于 0.7 ODNC>0.7
?陽(yáng)性對(duì)照平均 OD 小于陰性對(duì)照平均 OD 的 30% ODPC/ODNC<0.3
九、注意事項(xiàng)
1.試劑盒各組分使用前，應(yīng)平衡至室溫，使用后放回各自保存溫度進(jìn)行保存。
2.試劑盒開(kāi)封后應(yīng)盡快使用，-20℃保存樣品應(yīng)避免進(jìn)行反復(fù)凍融。
3.吸取液體時(shí)，應(yīng)盡量準(zhǔn)確，防止產(chǎn)生氣泡。
4.應(yīng)嚴(yán)格按照各操作步驟規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行操作。
5.終止液可導(dǎo)致嚴(yán)重?zé)齻?。若接觸皮膚或眼睛，請(qǐng)立即用大量清水沖洗并就醫(yī)。
6.底物避免接觸光照和任何氧化劑
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