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原位顯影技術(shù)
HE/化學染色實驗
蘇木素(Hematoxylin)-伊紅(Eosin)染色法,簡稱HE染色法。蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。HE染色提供良好的核漿對比染色,是細胞化學染色常用的一種方法。
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ARTICLES蘇木素(Hematoxylin)-伊紅(Eosin)染色法,簡稱HE染色法。蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。HE染色提供良好的核漿對比染色,是細胞化學染色常用的一種方法。
實驗步驟:
1. 樣品制備:對于貼壁生長細胞,胰酶消化,調(diào)整細胞濃度約1×105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),培養(yǎng)相應時間后,取出細胞爬片,用PBS 洗滌3次。
2. 樣品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗滌2次,每次1min。
3. 染核:蘇木素染液染色2-3min,自來水洗滌。
4. 分色:鏡下觀察,若細胞核染色過深,用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒,自來水洗滌。
5. 染胞質(zhì):浸入伊紅染液染色1min,自來水洗滌。
6. 吹干或自然晾干細胞爬片后,中性樹膠封片。
7. 若細胞用4%多聚甲醛固定,則染色時間相應延長,蘇木素染色12-15min,伊紅5min即可。
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