蛋白表達(dá)系統(tǒng)是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系。通過這個體系可以實現(xiàn)外源基因在宿主中表達(dá)的目的。
蛋白表達(dá)一般由以下幾個部分組成:
1.宿主:表達(dá)蛋白的生物體??梢詾榧?xì)菌、酵母、植物細(xì)胞、動物細(xì)胞等。由于各種生物的特性不同,適合表達(dá)蛋白的種類也不相同;
2.載體:載體的種類與宿主相匹配。根據(jù)宿主不同,分為原核(細(xì)菌)表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、植物表達(dá)載體、哺乳動物表達(dá)載體、昆蟲表達(dá)載體等。載體中含有外源基因片段。通過載體介導(dǎo),外源基因可以在宿主中表達(dá);
3.輔助成分:有的表達(dá)系統(tǒng)中還包括了協(xié)助載體進入宿主的輔助成分。比如昆蟲-桿狀病毒表達(dá)體系中的桿狀病毒。
對于一個蛋白來說:
首先了解該蛋白的基本信息,獲得序列信息,了解構(gòu)成情況。
然后再對蛋白序列進行生物信息學(xué)分析:
1.是否含有稀有密碼子;
2.是否有二硫鍵;
3.是否含有信號肽;
4.磷酸化和糖基化位點。
再構(gòu)建載體在不同的菌株中表達(dá),同時嘗試不同的誘導(dǎo)條件,包括:誘導(dǎo)時OD值、誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)時間、分析表達(dá)結(jié)果。同時進行細(xì)菌生長曲線作圖,觀察目的蛋白對宿主菌是否有毒害作用。通過終的表達(dá)結(jié)果分析過程。